今天是:

扫描关注微信:

感谢关注中关村中兽医药产业技术创新战略联盟官网,联盟秘书处电话:010-80743410

防疫动态

查看信息

浅谈口蹄疫诊断技术

发布时间:2017-8-16 责任编辑:联盟秘书处 点击量:189

口蹄疫(foot-and-mouthdisease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的一种急性、热性、高度接触性传染病。由于其发病率极高,严重影响畜牧业生产和国际贸易,因而受到各国的高度重视。

  口蹄疫病毒(FMDV)属于核糖核酸科、口蹄疫病毒属,无囊膜,由二十面体衣壳与内部的正义单链RNA组成,病毒RNA首先编码一个大的多聚蛋白,然后在蛋白酶的作用下切割成4个结构蛋白(VP1、VP2、VP3、VP4)组成衣壳,10个非结构蛋白(2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D、L、3AB、3ABC)参与病毒的复制与宿主的识别。口蹄疫病毒有7个血清型,分别为A、O、C、SATI、SATⅡ、SATⅢ及AsiaⅠ型。每个型又可分为若干个亚型。型及亚型之间几乎无交叉免疫反应,所以给口蹄疫的防治工作带来了很大难度。因此,准确而快速的诊断技术是预防和治疗该病的必要措施。

  1传统的口蹄疫诊断技术

  1.1

  临床诊断

  口蹄疫临床症状表现为高热、精神沉郁、食欲不振,脸颊、舌、口腔黏膜、鼻镜、乳头、蹄等出现水泡烂斑。与其他的水泡性疾病如猪水泡病(SwineVesicularDisease,SVDV)、水泡性口炎(vesicularstomatitis,VS)等症状相似,因此口蹄疫不能通过临床症状来确诊,而需要进一步通过实验室诊断。

  1.2

  病毒分离实验

  病毒分离技术是OIE规定诊断口蹄疫的金标准。其中小牛甲状腺细胞(CYT)对于口蹄疫病毒的检测最为敏感。其他的细胞如猪肾细胞(IBRS-2),仓鼠肾细胞(BHK)都可用于口蹄疫病毒的分离。其中CYT与(IBRS-2)可用来鉴别诊断口蹄疫与猪水泡病,因为口蹄疫病毒在两种细胞中都生长,而SVDV只在IBRS-2上生长。

  1.3

  补体结合实验

  起初补体结合实验多年用于检测口蹄疫,但其敏感性低、且易受到样本的干扰,逐渐被ELISA取代。

  1.4

  病毒中和实验(VNT)

  病毒中和实验是世界动物卫生组织(OIE)规定的标准检测口蹄疫方法,可以分型,但是其用活毒,对实验室要求很高,而且需要细胞培养,大约2-3天才可出结果,最重要的是该方法不能区分感染动物与疫苗免疫动物。

  2酶联免疫吸附(ELISA)诊断方法

  该法利用酶对底物的催化反应特性,将酶与抗体偶联并使之参与到抗原抗体反应中,依据底物所发生的变色反应程度,来指示和量化抗原抗体的反应水平。该法具有灵敏度高、特异性强、重复性好,不许动用活毒等优点。

  1

  液相阻断ELISA

  液相阻断ELISA是用FMDV灭活的140S制备抗血清或作抗原来检测FMDV的血清样品,主要用于检测免疫动物血清中抗体的分泌水平,以了解动物的免疫状态和抗病能力,具有快速、灵敏、准确等优点。其克服了血清中和试验无法推广的缺点,适合于大批样品的血清学调查,是国际认可的一种标准化诊断技术。但该法检测结果总有一定的假阳性出现,因此对待检的可疑阴性样品还需进一步用VNT确诊。

  2

  间接ELISA

  间接ELISA是以口蹄疫病毒的蛋白为抗原来测定动物血清样品,主要用于鉴别感染动物和注苗动物。它与其它ELISA的区别在于直接将病毒抗原包被于板上,简单易操作,并且克服了VIA琼脂扩试验敏感性低的缺点。目前许多实验室都己建立了测定该蛋白抗体的方法,该法具有特异性强、准确性高等优点,但操作过程较繁琐。

  3

  固相竞争ELISA

  固相竞争ELISA方法只需浓缩的、半纯化的灭活全病毒,146S做抗原就能检测FMDV的抗体,并且其特异性超过99.5%,敏感性可达100%。由于其优越的性能,被广泛地应用于许多实验室。但固相竞争ELISA由于需要大量的洗涤过程,减缓了样品的检测速度,所以在疾病暴发期间不能对大量的样品进行快速的检侧。

  4

  夹心ELISA

  夹心ELISA,主要用于FMD病原和血清样品的检测和诊断。它克服了补体结合试验样品定型率低的缺点,而且还能反映出疫苗与流行毒株间的抗原相关程度。2007年,吴国华等进一步发展了夹心ELISA,建立了可以给FMD定型的夹心ELISA方法,使得该方法具有快速、敏感、准确等优点,而且在检测田间样品时敏感性高于补体结合试验。

  3口蹄疫现场诊断技术

  虽然目前ELISA法诊断口蹄疫较为成熟,但其敏感性有限,因此实验室诊断主要是利用反转录PCR或实时定量PCR来检测病毒RNA,一些反转录PCR和实时定量PCR已经广泛用于检测FMDV。实时定量PCR具有敏感性高,检测速度快、不需要电泳等诸多优点而被OIE规定为FMDV分子诊断的标准方法。但实时定量PCR需要专业人士在专业的实验室内花费几个小时来完成。此外,将样品从可疑发病地点运输到实验室也将耗费大量时间而延误口蹄疫的诊断,同时样品需要低温保存,运输条件的变化可能会影响后续的检测结果。因此发展野外、现场诊断口蹄疫的技术必不可少。近几年来环介导等温PCR与横向流动免疫层析试纸条可快速、特异、现场诊断口蹄疫。

  1.环介导等温PCR(LAMP)

  LAMP可克服实时定量PCR的缺点,实现简单快速检测FMDV的目的。该方法仅需要一个简单的温箱或水浴锅,整个过程在恒温下进行。此外,LAMP反应合成大量的DNA而产生不溶性的白色焦磷酸镁沉淀,可以通过肉眼观察比浊度进行分析。因此LAMP比传统的依赖于凝胶的RT-PCR检测时间短、只需要简单廉价的反应仪器、可以通过肉眼观察结果等诸多优点而成功用来检测多种病原,例如口蹄疫病毒、猪瘟病毒、日本乙型脑炎病毒、和猪水泡病病毒等。

  2.横向流动免疫层析试纸条技术

  横向流动免疫层析试纸条技(LFI)可实现对口蹄疫现场快速诊断并分型的目的。在2007年的英国口蹄疫爆发期间,LFI已经用于诊断口蹄疫,该方法检测时间不超过10分钟。目前LFI可有效检测O、A、ASIA1抗口蹄疫非结构蛋白的抗体和结构蛋白的抗体。该方法借助胶体金技术,敏感性可比得上抗体夹心ELISA,各血清型特异性强,可用于现场快速诊断和口蹄疫分型。


  信息来源于中国动物保健

  
链接来源:https://mp.weixin.qq.com/s__biz=MjM5MDc2ODc3MQ
==&mid=2650671265&idx=3&sn=a70a0af5438d8ca521e8a0dceebe4c33&chksm
=beb5634d89c2ea5bc0884557732dfedb9571533c7c468bc7483e7ecd490d957341
68e5825b43&mpshare=1&scene=23&srcid=08158Gwdbz5hBvY78frQqOGF#rd

版权所有:中兽药产业创新战略联盟
信息化服务商:北京博叶华腾科技有限公司